第一幕
夜空中月光皎皎,在森林的一片空地上,提泰妮娅和奥布朗正为一个在树林中被发现的酣睡小儿而争夺不休。提泰妮娅最终得到了这个婴儿。愤怒之下,奥布朗召唤出精灵帕克,并派他去寻找一种具有魔力的花儿。若将这种花儿的汁液滴在熟睡者的眼皮上,熟睡者醒来时,便会深深爱上见到的第一个人或动物。奥布朗预谋以此报复提泰妮娅。
此时,有四位探险者进入森林,他们正在寻找异域生物做标本。四人间有着复杂的三角关系:海伦娜爱着狄米特斯,狄米特斯却钟情于赫米娅,赫米娅又和拉山德是一对幸福的鸳鸯。眼见这种情况,奥布朗命令帕克利用魔力之花让狄米特斯恋上海伦娜。然而,帕克却把两个男人弄混,错滴了花汁,结果引发了更多的麻烦。
提泰妮娅醒来,在花汁魔力的作用下,她爱上了乡巴佬波顿,此时的波顿已经被帕克变成了一头驴子。一直监视着二人的奥布朗,看到提泰妮娅被如此羞辱,心中乐不可支,而提泰妮娅却被蒙在鼓里。
第二幕
得知帕克把狄米特斯和拉山德弄混,错滴了花汁,奥布朗勃然大怒,勒令要惩罚帕克并解除混乱。最终,拉山德回到了赫米娅的怀抱,狄米特斯也爱上海伦娜。
夜晚将尽,波顿变回了人形,提泰妮娅和奥布朗化干戈为玉帛,温柔地把熟睡中的小婴儿送回了发现他的地方,让他回到了他自己的仲夏夜梦境。